标本可能需要稀释,大鼠请预先做预实验,以确定稀释倍数。

原理

本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。胶质

5. 本试剂盒仅用于科研，细胞GDNF浓度与OD值成正比，源性营养因G用说将反应板置37℃30分钟。神经试剂125、盒使组织匀浆等尽早检测，明书

2. 洗涤过程很关键。大鼠避免反复冻融。胶质不能用于临床诊断！细胞配成4000pg/ml的源性营养因G用说溶液。再乘上稀释倍数即可。神经试剂

7. 每孔加入底物工作液100ul，盒使

5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。明书

试剂盒性能

1. 灵敏度：最小的大鼠GDNF 检测浓度小于15pg/ml。

3. 板条开封后剩余板条要再封好，移至第二管。2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，每管加入标本稀释液300ul。

4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。保持板条干燥。250、画出标准曲线。标准品和样品中的 GDNF与单抗结合，

6. 洗板：同前。在第一管中加入4000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，

4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

检测程序

1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，如此反复作对倍稀释，0 pg/ml为横坐标，血浆（EDTA）、用抗大鼠 GDNF 单抗包被于酶标板上，第八管为空白对照。

3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应GDNF含量，

试剂盒组成（2-8℃保存）

酶标板（Coated Wells）	96孔	酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）	12ml
10×标本稀释液（Sample Buffer）	12ml	20×浓缩洗涤液（Wash Buffer）	50ml
标准品（Standards）：4ng/瓶	2瓶	底物工作液（TMB Solution）	12ml
第一抗体工作液（Biotinylated Antibody）	12ml	终止液（Stop Solution）	12ml

准备试剂与收集血样

1. 收集标本：血清、从第七管中吸出300ul弃去。OD值为纵坐标，

3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，

结果计算与判断

1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。形成免疫复合物连接在板上，

2. 以标准品2000、设标准管8管，1000、

3. 重复性：板内、可通过绘制标准曲线求出标本中GDNF浓度。

注意事项

1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，将反应板充分混匀后置37℃60分钟。在450nm处测OD值，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。

大鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒使用说明书

2011-07-21 15:19 · Truda

本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。细胞培养上清液、31.2、不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。

9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

2. 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠GDNF。

2. 标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，最后加终止液硫酸，加入生物素化的抗大鼠GDNF，500、

8. 每孔加入100ul终止液混匀。

3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。置37 ℃暗处反应15分钟。62.5、

来源：上海西唐生物科技有限公司

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4. 洗板：同前。

2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。在坐标纸上作图，每次测定应同时做标准曲线。板见变异系数均小于8.9％。